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El acervo está organizado en ocho salas, que permiten apreciar aspectos políticos, sociales y culturales de la historia nacional y provincial de los siglos XVIII, XIX y XX.
 En el ingreso, la Sala I evoca la etapa en que Santa Fe fue tenencia de gobernación de Buenos Aires desde el período colonial hasta 1815. Se informa acerca de la situación de guerra permanente, la condición de Santa Fe como espacio de “frontera” y el inicio de las luchas por la autonomía provincial. Del primer gobernador, don Francisco Antonio Candioti, conocido como “Príncipe de los Gauchos”, se exhibe el apero de montar de plata y oro, y la caja fuerte que le perteneciera.
Pueden apreciarse interesantes testimonios de mobiliario colonial: una silla de mano, un bargueño de madera policromada traído del Alto Perú, perteneciente a la familia Pujol Diez de Andino y una mesa de factura jesuítica del siglo XVIII. Entre las pinturas, el retrato “La Negra y el Niño”, realizado 1873 por la pintora Sor Josefa Díaz y Clusellas
 La Sala IIpermite abordar la época de los caudillos –primera mitad del siglo XIX - las luchas entre unitarios y federales, y los intentos de construcción de un estado nacional, tales como los tratados interprovinciales previos a la Constitución Nacional de 1853.
Se destacan las pertenencias del Brigadier Estanislao López, pechera, puños, y cinturón de su uniforme de gala; una cigarrera y pastillero confeccionados en rafia y obsequiados por don Juan Manuel de Rosas, en los que se leen las leyendas alusivas a los bandos existentes y al modo de confrontación existente; el facsímil del Tratado del Pilar –cuyo original se encuentra en el museo- y una carta donde se disponen los detalles de ejecución y entierro de Camila O´Gormann durante el gobierno de Rosas.
El encofrado: En un rincón de la habitación, sin revocar, se exhibe parte de la pared original de la casa que muestra la técnica del encofrado, utilizada por los indios en las construcciones de la época: en un armazón realizado en madera se vertía una mezcla de paja, bosta de caballo y tierra, se apisonaba, y cuando se secaba y compactaba, se le retiraba el armazón.
Como un interesante aporte de la vida cotidiana, se aprecian daguerrotipos familiares, singulares testimonios del siglo XIX, realizados con la técnica creada por Louis Jaques Daguerre en 1829 en Francia, a mitad de camino entre la pintura figurativa y la fotografía
 La Sala III abarca el período comprendido entre 1838 y 1853 -previo a la organización nacional – caracterizado por la fuerte influencia del Gral. Juan Manuel de Rosas y la marcada división entre sus seguidores y adversarios.
Se aprecian retratos de gobernadores : Domingo Cullen, de final trágico; Juan Pablo López ( atribuido al pintor Amadeo Gras) hermano de Estanislao, involucrado en las rencillas y circunstancias de las luchas civiles ; el Gral. Pascual Echagüe( en gran óleo realizado por Félix Revol) colaborador de Rosas, gestor de importantes realizaciones en la provincia. El retrato de su esposa, doña Manuela Puig de Echagüe realizado por C. Pellegrini constituye también un interesante testimonio de pintura histórica argentina.
Entre los objetos , se destacan una petaca de cuero , floreros isabelinos, el sello utilizado por el gobernador Cullen y un trabuco “ naranjero” del siglo XIX.
 La Sala IV está dedicada a acontecimientos, ámbitos y personajes vinculados a la organización nacional, en particular al Congreso General Constituyente de 1853 realizado en Santa Fe. Se observan fotografías del antiguo Cabildo–demolido en 1907- sede del Congreso, parte del mobiliario -sillones, la mesa de la Constitución y retratos de congresales, realizados por Antonio Alice ( autor de la obra Los Constituyentes que se contempla el Salón de los Pasos Perdidos del Congreso Nacional)
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Se exponen el sello de plata utilizado en las actas del Congreso y el escudo de la provincia, que estuvo en el frontis del Cabildo , fue luego rescatado y donado al museo. Completan la sala los retratos de los diputados por Santa Fe, Juan Francisco Seguí y Manuel Leiva, y las llaves del antiguo cabildo.
 La Sala V recuerda las gestiones provinciales posteriores a 1853, una época caracterizada por la fundación de las colonias, la expansión de la frontera , el ferrocarril, los avances que marcaron la transición hacia la provincia moderna. Puede verse el retrato de don Nicasio Oroño, recordado por su espíritu progresista y su impulso a leyes tales como la de Registro Civil; José Gálvez, fundador de la Universidad Provincial de Santa Fe –hoy Universidad Nacional del Litoral- e impulsor del ferrocarril que iba hacia las colonias, y una interesante fotografía de la colocación de la piedra fundamental del puerto de Santa Fe en 1904 .
 La Sala VI cuya muestra se titula SIGLO XX AYER NOMÁS fue incorporada al museo en el año 2005: nos propone un acercamiento a escenarios, personajes y costumbres del Siglo XX. Puede apreciarse panelería fotográfica organizada por décadas, cámaras de estudio , discos de pasta y vitrola, medallas recordativas y pequeños objetos de uso personal que evocan a personajes públicos tales como Aldo Tessio y don Carlos Silvestre Begnis.
 Retornando al ala sur de la casona, en la Sala VII , dedicada a Vida Cotidiana de antaño, se exhiben objetos de uso decorativo y doméstico, atuendo y mobiliario del siglo XIX, que si bien no son representativos de todo el universo social, permiten conocer ciertos aspectos de la moda y usos de la época.
Se destacan el pianoforte que perteneció al secretario del General Manuel Belgrano, la platería doméstica, principalmente mates y sahumadores; los abanicos, misales, carnets de baile y peinetones de carey. Entre los elementos ligados a las vivencias diarias, juguetes, morteros, ollas y paila completan la sala.
 La Sala VIIIalberga pinturas e imágenes religiosas, tanto de vestir como de bulto ; muchas de ellas , como la de San Juan Nepomuceno y San Miguel Arcángel y las tallas de factura indígena de pequeñas dimensiones ,fueron donadas por la Compañía de Jesús al crearse el museo. .Entre las pinturas expuestas en la sala, se destaca Vidas de Anacoretas, realizada en el siglo XVIII por primer plástico santafesino , el ermitaño Javier de la Rosa.
Las Salas VII y VIII suelen destinarse a Muestras Temporarias.
Plano del Museo
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